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蛋白酶K，是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵。此酶經(jīng)純化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶K在尿素和SDS中穩(wěn)定，還具有降解天然蛋白質(zhì)的能力，因而它應(yīng)用很廣泛，包括制備脈沖電泳的染色體DNA，蛋白質(zhì)印跡以及去除DNA和RNA制備中的核酸酶。蛋白酶K的一般工作濃度是50—100μg/ml。在較廣的pH范圍內(nèi)(pH4-12.5)均有活性。推薦反應(yīng)緩沖液：50mMTris-HCl(pH7.5),10mMCaCl2。蛋白酶K配制標(biāo)...

在PCR實(shí)驗(yàn)中使用適當(dāng)?shù)木酆厦笇⒋_保*的產(chǎn)量和特異性，但市場(chǎng)上有那么多種聚合酶，如何選擇，有時(shí)還真是個(gè)難題。廠(chǎng)家一般都會(huì)提供一個(gè)選擇指南，列出每個(gè)產(chǎn)品的特異性、保真度、產(chǎn)量等。保真度是實(shí)驗(yàn)成功zui關(guān)鍵的因素之一，不可不重視。什么是聚合酶保真度？DNA聚合酶的保真度是指準(zhǔn)確復(fù)制目的模板的結(jié)果。具體來(lái)說(shuō)，這涉及到多個(gè)步驟，包括讀取模板鏈，選擇正確的三磷酸核苷，并將此核苷酸插入3’引物末端的能力。為了區(qū)分正確和錯(cuò)誤的核苷酸，一些DNA聚合酶具有3’到5’核酸外切酶活性。這種“校正...